Srovnání vyšetřovacích metod pro průkaz Trichomonas vaginalis
Cílem testu bylo zhodnotit citlivost metod využívaných pro diagnostiku Trichomonas vaginalis. Pracovali jsme s axenickými kulturami a do testu zahrnuli čtyři metody: rapid test, vyšetření PCR, mikroskopické odečítání barveného preparátu a kultivační vyšetření.
Popis metod
- Rapid test: rychlý imunochromatografický test Trichomonas vaginalis card od firmy InterMedical
- Vyšetření PCR: Multiplexní PCR v reálném čase soupravou Allplex STI Essential Assay od firmy Seegene
- Mikroskopické odečítání barveného preparátu: suchý poševní nátěr fixovaný na podložní sklo a barvený dle Giemsy-Romanowského
- Kultivační vyšetření: mikroskopická diagnostika ze Szenešových půd, odečet v 1. až 7. dni kultivace
Metodika laboratorního zpracování
Provedli jsme postupně se zvyšující ředění 24 hodinové axenické kultury Trichomonas vaginalis. U každého ředění jsme zjistili množství TV v inokulační dávce 10 µl (viz výsledná tabulka).
Vytvořili jsme čtyři alikvoty od každého ředění a provedli výše uvedená vyšetření. Odečty výsledků jsme zaznamenali do databáze.
Test jsme prováděli ve třech sériích, vždy po 17 vzorcích + 2 negativní kontroly. V tabulce 1 je každá série označená jinou barvou.
Výsledná tabulka
| ředění | TV1 | TV2 | TV3 | R1 | R2 | R3 | C1 | C2 | C3 | G1 | G2 | G3 | K1 | K2 | K3 | |
| 0 | 13 850 | 14 000 | 10 350 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| 1 | 1: 2 | 6 650 | 10 900 | 8 300 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 2 | 1: 3 | 4 100 | 5 650 | 8 550 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 3 | 1: 4 | 4 750 | 3 150 | 4 300 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 4 | 1: 5 | 2 800 | 2 600 | 2 700 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 5 | 1: 6 | 3 200 | 3 100 | 4 450 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 6 | 1: 7 | 2 950 | 3 200 | 3 600 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 7 | 1: 8 | 1 550 | 1 750 | 1 400 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 8 | 1: 9 | 2300 | 1800 | 5150 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 9 | 1:10 | 1850 | 1750 | 2100 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 10 | 1:15 | 1150 | 750 | 550 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 11 | 1:20 | 600 | 950 | 800 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 12 | 1:30 | 1000 | 900 | 650 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 13 | 1:40 | 400 | 300 | 450 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 14 | 1:50 | 1050 | 500 | 400 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 15 | 1:100 | 400 | 300 | 950 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 0 | 1 |
| 16 | 1:500 | 100 | 100 | 100 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 | 0 | 1 |
| 17 | NEG | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 18 | NEG | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Popis tabulky
Provedeny tři série vyšetření, série 1-3 označeny barevně.
TV1-TV3 počet trichomonád na 10 µl v sérii 1-3
R1-R3 rapid test vyšetření rapid testem v sérii 1-3;0=NEGATIVNÍ,1=POZITIVNÍ
C1-C3 PCR vyšetření v sérii 1-3;0=NEGATIVNÍ,1=POZITIVNÍ
G1-G3 mikroskopický odečet po obarvení v sérii 1-3;0=NEGATIVNÍ,1=POZITIVNÍ
K1-K3 kultivační vyšetření v sérii 1-3;0=NEGATIVNÍ,1=POZITIVNÍ
Metodika statistického zpracování
Pro popis dat byla použita základní popisná statistika (medián, ar. průměr, směrodatná odchylka (sd), minimální a maximální hodnota).
Pro grafické znázornění byly použity krabicové grafy (dolní hrana krabice je 25. percentil, uvnitř krabice – medián, horní hrana krabice je 75. percentil).
Počty TV/10 µl byly kategorizovány na dvě skupiny 0 (neg.)/>0 (poz.). Srovnání s uvedenými kategoriemi a výsledky testů byly hodnoceny pomocí testu symetrie na hladině významnosti 5 %. Kvalita testu byla hodnocena na základě senzitivity, specificity a dále byla vyjádřena pozitivní a negativní prediktivní hodnota (PPV resp. NPV), bodové odhady byly doplněny 95% intervaly spolehlivosti (IS). Pro úplnost je uvedena také area pod ROC křivkou (max. hodnota 1, čím vyšší hodnota, tím lepší shoda výsledků). Pro vyhodnocení byl použit program Stata verze 17.
Výsledky statistického zpracování
1. Popis počtu TV/10 µl dle výsledků testů
Rapid test hodnotil negativní výsledky v rozmezí 0-1750 TV/10 µl, pozitivní výsledky od 1800 a do 14050 (tab. 2, obr. 1).
| Počet TV/10 µl | počet | medián | ar. průměr | sd | min. | max. | |
| Celkem | 57 | 1550 | 2722,8 | 3363,1 | 0 | 14000 | |
| Rapid | Negativní | 31 | 500 | 608,1 | 532,1 | 0 | 1750 |
| Pozitivní | 26 | 3850 | 5244,2 | 3583,1 | 1800 | 14000 | |
| PCR | Negativní | 6 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Pozitivní | 51 | 1800 | 3043,1 | 3416,6 | 100 | 14000 | |
| Giemsa | Negativní | 8 | 0 | 25 | 46,3 | 0 | 100 |
| Pozitivní | 49 | 1850 | 3163,3 | 3432,8 | 100 | 14000 | |
| Kultivace | Negativní | 8 | 0 | 50 | 106,9 | 0 | 300 |
| Pozitivní | 49 | 1850 | 3159,2 | 3436,4 | 100 | 14000 | |
Obr. 1 Grafické znázornění počtu TV/10 µl dle výsledků Rapid testu, PCR, mikroskopie - Giemsa a kultivace
2. Srovnání výsledků a kategorií dle počtu TV/10 µl
Na základě statistického vyhodnocení byl zjištěn statisticky významný rozdíl (p < 0,001) mezi výsledky Rapid testu a kategoriemi počtu TV/10 µl. Z 51 vzorků s počtem TV/10 µl bylo 25 (49 %) vyhodnoceno jako falešně negativní (tab. 3).
Ostatní metody se statisticky významně od kategorií dle počtu TV/10 µl nelišily. U PCR byla zjištěna 100% shoda, u vyšetření Giemsa a kultivace byly zjištěny 2 falešně negativní vzorky (tab. 2).
| počet TV/10 µl | |||||
| Test | kategorie | 0 | >0 | Celkem | p-hod.* |
| Celkem | 6 | 51 | 57 | ||
| Rapid | neg. | 6 | 25 | 31 | <0,001 |
| poz. | 0 | 26 | 26 | ||
| PCR | neg. | 6 | 0 | 6 | 1 |
| poz. | 0 | 51 | 51 | ||
| Giemsa | neg. | 6 | 2 | 8 | 0,157 |
| poz. | 0 | 49 | 49 | ||
| Kultivace | neg. | 6 | 2 | 8 | 0,157 |
| poz. | 0 | 49 | 49 | ||
*neparametrický test symetrie
Senzitivita a specificita
Senzitivita u Rapid testu byla 51 %, specificita 100 %. Negativní prediktivní hodnota byla jen 19,3 %. A tomu odpovídá také hodnota plochy pod ROC křivkou 0,755 (tab. 4).
Nejsenzitivnější je metoda PCR (100 %) a tomu také odpovídá nejvyšší hodnota plochy pod ROC křivkou 1.
| Bodový odhad | 95% IS | |||
| Počet TV/ 10 µl | >0 | 89,5 % | 81,5 % | 97,4 % |
| Rapid | Sensitivity | 51,0 % | 38,0 % | 64,0 % |
| Specificity | 100 % | 54,1 % | 100 % | |
| PPV | 100 % | 86,8 % | 100 % | |
| NPV | 19,3 % | 7,5 % | 37,5 % | |
| ROC area | 0,755 | 0,686 | 0,824 | |
| PCR | Sensitivity | 100 % | 93 % | 100 % |
| Specificity | 100 % | 54,1 % | 100 % | |
| PPV | 100 % | 93 % | 100 % | |
| NPV | 100 % | 54,1 % | 100 % | |
| ROC area | 1 | 1 | 1 | |
| Giemsa | Sensitivity | 96,1 % | 86,5 % | 99,5 % |
| Specificity | 100 % | 54,1 % | 100 % | |
| PPV | 100 % | 92,7 % | 100 % | |
| NPV | 75 % | 34,9 % | 96,8 % | |
| ROC area | 0,98 | 0,95 | 1 | |
| Kultivace | Sensitivity | 96,1 % | 86,5 % | 99,5 % |
| Specificity | 100 % | 54,1 % | 100 % | |
| Positive | 100 % | 92,7 % | 100 % | |
| Negative | 75 % | 34,9 % | 96,8 % | |
| ROC area | 0,98 | 0,95 | 1 | |
IS – interval spolehlivosti, PPV – pozitivní prediktivní hodnota, NPV – negativní prediktivní hodnota, ROC area – plocha pod Receiver Operating Characteristic křivkou
Shrnutí statistického zpracování
Srovnání testu bylo povedeno na 57 vzorcích, kdy počty TV/10 µl se pohybovaly od 0 do 14 000. Celkem u 6 (10,5 %) vzorků byla hodnota 0, tyto vzorky byly označeny jako negativní.
Rapid test vyhodnotil jako pozitivní vzorky až od hodnoty 1800. Výsledky Rapid testu se významně lišily od hodnocení dle kategorií v závislosti na počtu TV/10 µl. Senzitivita Rapid testu byla pod 50 %, přesně 49,1 %. Specificita byla 100 %.
Nejsenzitivnější test je PCR (100 %).
Výsledky srovnání diagnostických metod, diskuze
Metoda PCR, kultivace a mikroskopický odečet zachytily trichomonády v ředění 1:500 (100 TV/10 µl). Rapid test vykázal slabou reakci v ředění 1:10 (1 800 TV/10 µl). Metody PCR, mikroskopický odečet barveného preparátu a kultivace byly o řád (50x) citlivější než rychlotest. Co se týká zhodnocení finanční nebo pracovní náročnosti metod, nejjednodušší postup má provedení rychlotestu při střední finanční zátěži. Metoda mikroskopického odečtu barveného nátěru a kultivace jsou náročné na pracovní postup a erudici odečítajícího pracovníka, jsou však dle aktuálního ceníku nejméně nákladné. Naopak, ekonomicky nejnákladnější je PCR vyšetření při nutnosti dodržení vysokého laboratorního standardu.
Usuzujeme, že rapid testy by mohly mít smysl v ordinacích gynekologů díky jednoduchému a rychlému potvrzení původce u indikovaných klinických nálezů vzhledem ke 100% pozitivní prediktivní hodnotě, ale je nutné brát k úvahu v případně negativního výsledků jejich velmi nízkou negativní prediktivní hodnotu. Pro širší a přesnější diagnostiku doporučujeme u pacientek provádět poševní stěry pro mikroskopické a kultivační vyšetření nebo odběry na PCR vyšetření v rámci panelu STD.
Závěr
Vzhledem k poměru citlivosti a finanční náročnosti doporučujeme pokračovat v uznávaném standardu mikroskopického odečítání preparátu barveného dle Giemsa - Romanowski spolu s kultivací.
MVDr. Romana Mašková, Mgr. Danuše Vaňková, Mgr. Michaela Kantorová, doc. Ing. Hana Tomášková, Ph.D.
Aktuality
Popis vyšetření a očkování
Světový den ústního zdraví
Zveme na akci Světový den ústního zdraví, která se koná 24.3.2024 v Gongu, Dolní Vítkovice.
Možnost kombinované formy studia na OU
Ostravská univerzita nabízí studium oboru Ochrana a podpora veřejného zdraví
Nabídka zaměstnání
Asistent/ka vedoucí a účetní
Zkoušení způsobilosti - Měření elektrického osvětlení
Ve dnech 28.-29. května 2024 pořádáme ve spolupráci s VŠB-TU Ostrava další ročník zkoušek způsobilosti měření elektrického osvětlení.
Zobrazit všechny aktuality
