Testování neutralizačních protilátek proti SARS-CoV-2
ZÚ se sídlem v Ostravě obdržel povolení SÚJB k nakládání s virem SARS-CoV-2 a zahajuje testování neutralizačních protilátek proti SARS-CoV-2 metodou virusneutralizačního testu. Zavedením tohoto testu rozšiřuje poskytované spektrum vyšetření dosud nabízených sérologických testů ELISA IgG, IgM, IgA. Virologové ze ZÚ v Ostravě mají dlouholeté zkušenosti s virusneutralizačními testy pro různé viry a díky tomu rychle vyvinuli tento test i na SARS-CoV-19.
VNT běžně vyšetřujeme ze vzorku séra či plazmy. Je nejspecifičtějším sérologickým testem a zlatým standardem v detekci specifických protilátek proti virům, proto slouží jako konfirmační test. U sérologické diagnostiky SARS-CoV-2 je jeho role nezastupitelná vzhledem ke značně rozdílné senzitivitě a specificitě komerčních testů ELISA a rychlotestů, které jsou předmětem řady debat v odborných kruzích i veřejnosti.
V současné době, kdy není dosud k dispozici vakcína ani schválená antivirová léčba, je v popředí zájmu léčebné použití konvalescentní plazmy dárců po prodělaném onemocnění COVID-19. Slibné je rovněž profylaktické podání konvalescentní plazmy osobám s rizikem závažného průběhu onemocnění. Podle doporučeného postupu vydaného Evropskou komisí v dubnu 2020 je doporučeno k léčebným účelům používat plazmu dárců s titrem neutralizačních protilátek 320 nebo vyšším (odkaz zveřejněn na webu SÚKL). http://www.sukl.cz/zdravotnicka-zarizeni/doporuceny-postup-pro-vyrobu-a-uziti-covid-19-konvalescentni
Tento titr lze stanovit pouze virusneutralizačním testem. Podle zveřejněných protokolů by měli být příjemci konvalescentní plazmy monitorování měřením titrů neutralizačních protilátek před zahájením jejího podání i v dalším průběhu léčby.
Dalším využitím VNT je stanovení hladiny neutralizačních protilátek v populaci pro zjištění stavu promořenosti nebo monitorování protilátek u osob po prodělaném onemocnění COVID-19 ke zjištění doby trvání jejich ochranného účinku. Metoda VNT má vyšší specificitu i citlivost než rychlotesty použité k těmto účelům nebo ELISA testy. Lze předpokládat, že u některých osob po prodělané infekci SARS-CoV-2 nebyly protilátky v rychlotestech detekovány pro jejich nízkou citlivost, naopak jiní měli výsledky falešně pozitivní. Testem VNT by byly zachyceny osoby, které skutečně infekci prodělaly.
Ideálně VNT kombinujeme s pečlivě vybranou metodou ELISA, která umožňuje rozlišit jednotlivé třídy protilátek (IgG, IgM, IgA). Nevýhodou metody VNT je její delší trvání (5-7 dní), neboť se jedná o biologický pokus s využitím živého viru a vnímavých buněk. Metoda VNT nerozliší třídy protilátek, ale zachytí pouze ty protilátky, které mají neutralizační (ochranný) účinek.
Na obrázku je mikrotitrační destička, na které je vyšetřeno 8 vzorků sér metodou VNT (na každém řádku je jeden vzorek v postupném ředění 1:10 až 1: 2560). Červeného zbarvení je docíleno použitím speciálního barviva, které je absorbováno do cytoplazmy živých buněk nepoškozených virem. Séra pacientů obsahující neutralizační protilátky ochrání buňky před infekcí virem SARS-CoV-2, které zůstávají živé i v jeho přítomnosti a příslušné jamky se zbarví červeně. Jamky se vzorky, které neobsahují neutralizační protilátky, zůstávají bezbarvé, protože přítomný virus buňky infikoval a usmrtil. Do prvních 3 jamek každého řádku se nepřidává virus, slouží k ověření životaschopnosti buněk pouze za přítomnosti vyšetřovaného vzorku, proto by měly vždy být červeně zbarvené.
První výsledky získané na souboru pacientů po prodělaném onemocnění COVID-19 a negativních kontrolách potvrzují jeho vysokou specificitu i senzitivitu. Všechny vzorky s pozitivním výsledkem VNT pocházely od pacientů s PCR potvrzenou prodělanou infekcí SARS-CoV-2, zatímco VNT negativní vzorky pocházely od pacientů, u nichž SARS-CoV-2 infekce nebyla potvrzena.
Ve srovnání s VNT vykazovaly rychlotesty i komerční ELISA testy nižší specificitu i senzitivitu. VNT nerozlišuje třídy protilátek, proto ani u RT a ELISA testů nebyly v porovnání rozlišeny třídy protilátek. Za pozitivní je považován vzorek s pozitivitou alespoň v jedné třídě testovaných protilátek, za negativní jsou považovány vzorky s negativními výsledky ve všech třídách protilátek.
Rychlotesty měly ve srovnání s VNT senzitivitu v rozmezí 55-73%, specificitu 75-100%. ELISA testy měly ve srovnání s VNT senzitivitu 82% a 89%, specificitu 50% a 85%.
Vzhledem k malému počtu vyšetřených vzorků, zejména v rychlotestech, však nelze jednoznačně stanovit charakteristiku testů, výsledky jsou tedy jen orientační.
| počet vzorků VNT pozit. |
počet vzorků RT pozit. (senzitivita %) |
počet vzorků VNT negat. |
počet vzorků RT negat. (specificita %) |
|
|---|---|---|---|---|
| RT 1 (B) | 11 | 8 (73%) | 4 | 3 (75%) |
| RT 2 (N) | 11 | 6 (55%) | 4 | 4 (100%) |
| RT 3 (E) | 22 | 16 (73%) | 7 | 6 (86%) |
| RT 4 (I) | 20 | 11 (55%) | 4 | 4 (100%) |
| počet vzorků VNT pozit. |
počet vzorků ELISA pozit. (senzitivita %) |
počet vzorků VNT negat. |
počet vzorků ELISA negat. (specificita %) |
|
|---|---|---|---|---|
| ELISA 1 (E) | 38 | 34 (89%) | 20 | 17 (85%) |
| ELISA 2 (N) | 34 | 28 (82%) | 18 | 9 (50%) |
MUDr. Hana Zelená, Ph.D.
vedoucí oddělení virologie CKL ZÚ se sídlem v Ostravě
Aktuality
Akční nabídka na rozbory vybraných zdravotně závažných ukazatelů
Environmentální vyúčtování za rok 2024
Dokument
Den otevřených dveří Krajské hygienické stanice Moravskoslezského kraje
Zveme Vás dne 1.5.2025 na akci konanou ve spolupráci KHS MSK & ZÚ Ostrava & LF OU
Den zdraví v Bruntále a Havířově
Využijte akce pro své zdraví
Den otevřených dveří
Srdečně Vás zveme na DEN OTEVŘENÝCH DVEŘÍ pro lékaře a studenty lékařských fakult. 27. března 2025 | 13:00 hodin
Zobrazit všechny aktuality
